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PCR
細胞培養技術服務

細胞培養技術服務

服務編碼

項目名稱

項目報價

項目周期

BT5001

細胞培養

2000元

1-2周

BT5002

細胞瞬時轉染

3000元

1-2周

BT5003

穩定細胞系構建

咨詢

咨詢

一、服務內容

1、細胞轉染和穩定表達細胞株篩選

通過轉染試劑或電穿孔方式等方式,將目的基因導入貼壁細胞或懸浮細胞24-48小時后,目的基因即在細胞內表達。此時為了建立穩定細胞系,可根據不同基因載體中所含的抗性標記,選用相應的藥物對靶細胞進行篩選,從而得到穩定表達外源基因的細胞克隆。觀察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能(短時間即可進行觀察,但效應會很快丟失)。

2、針對不同種類細胞使用藥物,低氧,壓力等外源因素進行刺激等處理,建立相關的細胞模型,從而進行后續的研究工作。

二、樣品要求(樣品處理及保存見附件)

1干冰運輸:取對數生長期的細胞,消化后低速離心1000rpm5min收集細胞,加入適量配制好的凍存液后吹打均勻。將細胞分裝入凍存管中,標明細胞的名稱、細胞代次、凍存時間及操作者;放4℃冰箱30min,-2030min1h-80℃過液,然后放入液氮罐;細胞數目不少于5×106/ml;

2常溫運輸:細胞貼壁覆蓋瓶底面積達40%以上時,裝滿培養液,瓶口用封口膜封好,裝入盒子,盒子里用泡沫或棉花塞滿,讓瓶子固定在盒子中。

三、服務特點

1、針對不同細胞系篩選合適的轉染試劑和質粒濃度配比,提高轉染效率和蛋白表達量

2、豐富的抗生素篩選經驗和單細胞克隆鑒定方法提高實驗效率

3、構建的穩定表達細胞株可穩定傳代,極少發生性狀丟失

四、收費標準

服務項目

收費標準¥

實驗周期

蛋白瞬時表達或敲低

基因表達或敲低載體構建

請參見載體構建目錄

2-3

質粒大提(含去內毒素)

700/質粒

1

載體轉染

3000/樣品

1

Western Blot檢測蛋白表達或敲低

2000/目的蛋白/

2

蛋白穩定表達細胞株構建(混合克?。?/span>

表達載體構建

請參見載體構建目錄

2-3

質粒大提(含去內毒素)

700/質粒

1

轉染和抗生素篩選

40000/細胞系

3-4

Western Blot檢測穩定細胞株蛋白表達

2000/目的蛋白/

2

蛋白穩定表達細胞株構建(單克隆)

表達載體構建

請參見載體構建目錄

2-3

質粒大提(含去內毒素)

700/質粒

1

轉染和抗生素篩選

50000/細胞系

6-8

Western Blot檢測穩定細胞株蛋白表達

2000/目的蛋白/

2

蛋白敲低細胞系構建(單克?。?/span>

shRNA表達載體的構建

請參見載體構建目錄

2-3

質粒大提(含去內毒素)

700/質粒

1

轉染和抗生素篩選

60000/細胞系

6-8

Western Blot檢測敲低細胞株蛋白表達

2000/目的蛋白/

2

蛋白真核表達(分泌表達)

分泌型表達載體的構建

請參見載體構建目錄

2-3

質粒大提(含去內毒素)

700/質粒

1

細胞轉染

3000/質粒

2

蛋白表達檢測(Western Blot ELISA

2000/目的蛋白/膜;600/

2

蛋白表達和純化

20000/mg

2

五、客戶提供材料

1、待克隆基因和載體信息,待敲低基因信息和shRNA序列信息(如無相關shRNA序列信息,本公司可代為設計并收取相關費用);

2、待轉染細胞株(如需使用常用腫瘤細胞株,如293/293THeLa等可由本公司提供);

3、陽性對照樣品(盡量提供)

4、相關文獻(可選)

六、提交給客戶結果

1、構建完成的載體和甘油菌株;

2、完整測序報告和序列堿基圖

3、載體真核表達鑒定結果

4、載體真核表達蛋白

5、穩定表達細胞株>1×107

6、穩定敲低細胞株>1×107

7、完整實驗報告(包括基因擴增圖,細胞株過表達和敲低檢測結果圖等)







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