U2OS細胞的培養
本發明構建了能穩定表達C-Myc-ER融合蛋白的U2OS細胞株。C-Myc作為一個癌基因，同時又是一個轉錄因子，能夠調控細胞內15%的基因轉錄，參與到細胞內的很多生命活動中，比如細胞增殖、凋亡、等過程，也涉及到腫瘤的發生和進展等病理過程。該細胞可以通過加入4-OHT，激活C-Myc發揮轉錄因子活性。
細胞培養
病毒包裝細胞Plat-E細胞，骨肉瘤U2OS細胞，培養于DMEM培養基中（含10 %肽牛血清、100 U/ml青霉素、100 ug/ml鏈霉素），將培養瓶放置于37°C、5 % CO2飽和濕度培養箱中培養，每1-2天更換培養基一次。當細胞生長到覆蓋瓶底壁80 %時，用0.25 %胰蛋白酶消化貼壁細胞，傳代后繼續放置于培養箱中。
重組質粒構建
C-Myc-ER基因片段合成，經PCR擴增后，用BamH I和EcoR I雙酶切PCR產物和pBABE質粒，然后用T4連接酶連接片段和質粒，置于12°C過夜，**天用感受態細菌E.coli DH5α轉化，涂抹于含青霉素（100 ug/ml）的LB瓊脂糖培養板，置于37°C培養箱培養12-14小時，挑取單克隆，用含青霉素的LB培養液中培養12-14小時，轉速為280 rpm，培養溫度為37 °C。用質粒小提試劑盒提取質粒后用BamH I和EcoR I酶切鑒定并送測序。
尊敬的客戶：
本公司還有5637細胞、ARPE-19細胞、人臍靜脈血管內皮細胞產品，您可以通過網頁撥打本公司的服務電話了解更多產品的詳細信息，至善至美的服務是我們的追求，歡迎新老客戶放心選購自己心儀產品，我們將竭誠為您服務！
